产品货号:
KD3089
中文名称:
两性电解质(pH4-6)
英文名称:
Ampholine pH4-6
产品规格:
12mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
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产品说明:
两性电解质就是既能当酸又能当碱用的电解质。通常为两性元素的氧化物的水合物、氨基酸等。两性电解质在大于其等电点的pH环境中解离成带负电荷的阴离子,向电场的正极泳动;在小于其等电点的pH环境中解离成带正电荷的阳离子,向电场的负极泳动。这种泳动只有在等于其等电点的pH环境中,即蛋白质所带的净电荷为零时才能停止。两性电解质适用于植物蛋白的等电聚焦。
凝胶溶解:
1.30%丙烯酰胺(Acr-Bis):30g丙烯酰胺+1.5g双丙烯酰胺加水至100mL,定溶后过滤。
2.甘-T:23mL丙三醇+0.5mL TRITON加水至100mL。
3.1%四甲基乙二胺(TEMED):1mL TEMED加水至100mL。
4.1%过硫酸铵(AP):1g过硫酸铵加水至100mL。
5.顺丁烯二酸缓冲液:3.08g氢氧化钠+5.8g顺丁烯二酸加水至100mL。
6.1%α-萘脂:1g醋酸-α-萘脂加100mL正丁醇。
7.7%冰乙酸:70mL冰乙酸加水至1000mL。
电泳操作:
(1)样品处理
浸泡:先将所需鉴定的种子浸泡一段时间,以备取胚使用。
取胚:用镊子把种子的胚取出,放入0.5或1.5mL离心管内。
研磨:在离心管内加入0.1mL蔗糖提取液,然后将胚研成匀浆,放入冰箱保存。
(2)凝胶制备
1.配制凝胶前,应把玻璃板准备好。即将两块干净的玻璃板叠放在一起,之间夹上所需凝胶厚度的胶条进行四边密封,一端留有小口用来凝胶。然后用文具夹奖玻璃板四周固定好。注意夹子作用力点在胶条正中,以防漏胶。
2.配制凝胶时,先将所需贮备液自冰箱中取出放置室温。
3.将各种贮备液体按一定比例混合(见表1)最后加入0.5mL 1%过硫酸铵,搅拌均匀。然后用注射器吸净混合液,排除气泡,缓缓注入玻璃板的夹隙内。
4.将注入混合液的玻璃板静置放好,隔夜使用。
表1凝胶贮存液配比表
电泳:
1.制胶板:将胶板取出,揭去上层的玻璃板和胶条,然后用蒸馏水轻轻冲洗一下胶面。
2.点样:将浸入电极的滤纸条取出,压半较胶放在胶板上,然后放入电泳槽内,注意正负极相吻合。将电泳槽平置于冰箱内(电泳时的温度一般在0~4℃冰箱中进行),接通电源,把电泳仪调至电压50V,电泳以每板胶不超过17mA为准,然后开始电泳。进样时间一般在1.5~2小时。
3.揭样纸:待电流降至每板胶3mA以下时,切断电源取出胶板,揭去样纸200-320V继续电泳。
4.加压:当电泳降至每板胶3mA以下时,升高电压至500V,继续电泳1.5小时左右。
5.电泳降至每板胶3 mA以下时,切断电源结束电泳。
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